Бактериологическая лаборатория что исследуют
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ
Бактериологическая лаборатория — научно-практическое учреждение, выполняющее бактериологические, иммунологические и другие микробиологические исследования. В соответствии с дифференцированием микробиологии вообще и бактериологии как одной из ее отраслей существуют бактериологические лаборатории, имеющие разнообразные задачи и функции. Клинико-диагностические бактериологические лаборатории при больницах проводят исследования, необходимые для постановки или уточнения диагноза инфекционного заболевания, контролирующие эффективность лечения.
Специализация бактериологических лабораторий при больницах определяется профилем больницы (острые инфекционные заболевания, детские инфекционные заболевания, венерические заболевания, туберкулез и пр.). Бактериологические лаборатории при санитарно-эпидемиологических станциях, как и клинические лаборатории, занимаются диагностической работой, обслуживая больницы, не имеющие собственных лабораторий, проводят профилактическое обследование населения и санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов и воды.
Кроме медицинских, существует широкая сеть ветеринарных бактериологических лабораторий, выполняющих диагностические и профилактические исследования инфекционных заболеваний у животных (см. Ветеринарная лаборатория). Узкоспециализированными являются бактериологические лаборатории, выполняющие контрольные функции, как, например, бактериологические лаборатории при водопроводных станциях, контрольные лаборатории на предприятиях, выпускающих вакцины, сыворотки и другие бактерийные препараты. Специальные бактериологические лаборатории организованы при дезинфекционных учреждениях. Их задачей является бактериологический контроль качества проведенной дезинфекции. Наряду с бактериологическими лабораториями медицинского и ветеринарного профиля существуют специализированные бактериологические лаборатории, обслуживающие нужды пищевой промышленности (винодельческие, хлебопекарные, пивоваренные и прочие предприятия), сельского хозяйства и пр. В отличие от перечисленных бактериологических лабораторий, решающих практические задачи, в структуре соответствующих научно-исследовательских институтов предусмотрены бактериологические лаборатории разных профилей, предназначенные для решения различных исследовательских задач. Бактериологические лаборатории могут быть стационарными и передвижными. Последние используются для санитарно-противоэпидемического обслуживания воинских частей, а также в экспедиционных, полевых условиях (см. Лаборатория, в военно-полевых условиях). Кроме передвижных, в войсках имеются и стационарные лаборатории. Специфика исследований, проводимых в бактериологических лабораториях, обусловливает структуру лабораторий и режим работы в них.
Основным требованием, предъявляемым к бактериологическим лабораториям и вытекающим из специфики ее работы, является создание условий, обеспечивающих выполнение исследований в максимально стерильных условиях и гарантирующих персонал и окружающих от возможного заражения. Структура бактериологической лаборатории включает: собственно лабораторию и ряд дополнительных к ней подразделений. К ним относятся: средоварня, моечная, препараторская, стерилизационная и виварий (см.). Перечисленные подразделения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших бактериологических лабораториях виварий и специальная препараторская отсутствуют, а средоварня и стерилизационная могут быть объединены в одном помещении.
Устройство и оборудование
Помещение бактериологических лабораторий должно быть светлым и достаточно просторным. Стены должны быть выкрашены масляной краской, а пол — не иметь щелей. Окна лаборатории следует ориентировать на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. В бактериологической лаборатории должна быть умывальная раковина или умывальник, над которыми на полке помещается бутыль с раствором для дезинфекции рук. Рабочий стол бактериолога, по возможности, располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку (при отсутствии газовой — спиртовую). Обязательным оборудованием рабочего места является банка для пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой к-ты), закрывающийся фарфоровый или стеклянный сосуд для ваты, колодка — держатель для бактериальной петли, набор бактериальных стандартов, штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также покровные стекла. Обычно используют предметные стекла размером 26 X X 76 мм и толщиной 1 — 1,2 мм, покровные стекла 18 х 18 или 20 х 20 мм. Бактериологическая лаборатория должна быть снабжена металлическими подносами для переноса чашек Петри, оцинкованными ведрами или баками для сброса инфицированной посуды или инвентаря. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. Рабочий стол не должен быть загроможден лишними предметами. Обычно в бактериологической лаборатории оборудуют дополнительный небольшой стол для окраски фиксированных препаратов. На таком столе располагают: набор необходимых красителей и реактивов в колодке с пипетками и резиновыми баллончиками (рис. 1), эмалированный кювет или кристаллизатор с подставкой для препаратов, проволочный пинцет или пинцет Корне (рис. 2) для фиксации предметных стекол, листы фильтровальной бумаги для удаления жидкости с промытых препаратов, промыватель (рис. 3) или бутыль с водой. Бактериологическая лаборатория оснащается разнообразной посудой, необходимой для проведения исследований. Кроме обычной химической посуды (цилиндры, колбы, мензурки, мерные пипетки и пр.), необходима специальная, предназначенная для бактериологических и иммунологических анализов посуда: 1) стеклянные чашки Петри, используемые для выращивания бактерий на плотных средах и получения изолированных бактериальных колоний; 2) бактериальные матрацы (рис. 4) — плоские склянки (размером 22 x 17 x 5 см), которые используются для выращивания большого количества бактерий; 3) пробирки Ру с перетяжкой для выращивания бактерий на косяках картофеля; 4) вассермановские пробирки длиной 90 мм и внутренним диаметром 9—10 мм для постановки реакции связывания комплемента и реакции агглютинации; 5) преципитационные пробирки длиной 90 мм и диаметром 3—5 мм для постановки реакции преципитации; 6) бактериальные пробирки, служащие для выращивания бактерий на твердых и жидких питательных средах; 7) пастеровские пипетки, используемые для посевов жидких материалов, разведения жидкостей капельным способом, нанесения красителей и пр.; 8) пипетки Мора или пипетки с шарообразным расширением в средней части для засева инфицированного жидкого материала, а также автоматические пипетки или пипетки с резиновыми грушами, исключающие насасывание материала ртом. Для выращивания культур в жидких питательных средах, хранения и розлива питательных сред, реактивов и пр. применяется обычная лабораторная посуда. Посуда, используемая в бактериологической лаборатории, должна быть предварительно выщелочена, для чего ее обычно кипятят в 1—2% растворе соляной кислоты. Дезинфекцию бактериологической посуды, в которой культивируют микробы, следует осуществлять только при помощи высокой температуры без применения каких-либо дезинфицирующих средств, так как присутствие последних даже в виде следов может в дальнейшем затормозить развитие микробов. Посевы микроорганизмов в бактериологической лаборатории производят с помощью бактериологических петель, стеклянных или платиновых шпателей (рис. 5 и 6). Выращивание бактерий осуществляется в воздушном термостате (см.), а в крупных бактериологических лабораториях — в специальных термостатных комнатах.
При необходимости точного контроля температуры и относительно кратковременном выращивании бактерий или при постановке иммунологических реакций удобно использовать водяные ультратермостаты. Каждая бактериологическая лаборатория, где занимаются исследованием анаэробов, должна быть снабжена анаэростатом (см.), эксикаторами и вакуумными насосами для удаления воздуха. Последние используются также при проведении фильтрования. Для достижения наилучших асептических условий, необходимых при проведении посевов, выделении или пересеве культур, бактериологические лаборатории оснащают специальными застекленными боксами с предбоксниками. В боксе имеются газовая горелка, сосуд с дезинфицирующим раствором, а там, где возможно, бактерицидная увиолевая лампа. В случае отсутствия стационарного бокса при проведении некоторых работ, требующих высокой степени асептики, можно пользоваться переносным настольным боксом (см. Боксы, микробиологические).
Бактериальные культуры, лечебные и диагностические сыворотки, фаги и другие субстраты биологического характера (сыворотки, растворы пептонов и пр.) хранят в холодильнике. Бактериальные культуры полагается сохранять в запаянных пробирках или ампулах, для чего в бактериологических лабораториях необходимо иметь горелку для запаивания или обычную паяльную лампу. Обязательной принадлежностью любой бактериологической лаборатории является микроскоп (см.). Для большинства исследований используют микроскоп МБИ-3 и осветители. Научно-исследовательские бактериологические лаборатории оснащены также фазово-контрастными, люминесцентными и электронными микроскопами. Для количественного учета колоний бактерий, выросших на чашках Петри, используют счетчики разных систем. Одним из таких счетчиков является автоматический счетчик со сканирующим устройством и телевизионным контрольным приспособлением, позволяющим подсчитывать до 500 чашек в час (рис. 7). Важными элементами оборудования бактериологических лабораторий являются аппараты для встряхивания, используемые в тех случаях, когда необходимо в течение определенного времени обеспечить перемешивание и встряхивание материала (дефибринирование крови, гомогенизация материала и пр.). Для осаждения плотных частиц (микробные клетки, клетки тканей, взвесь исследуемого материала), находящихся в жидкости, используют центрифуги (см.). Для проведения большинства исследований наиболее часто применяют центрифуги, вращающиеся со скоростью 3000 — 3500 об/мин. При отсутствии электрических центрифуг пользуются центрифугами с ручным приводом.
Деятельность бактериологических лабораторий во многом зависит от соблюдения основного требования — работы в асептических условиях со стерильными объектами (инструменты, питательные среды, посуда). Поэтому в оснащении бактериологических лабораторий значительное место занимает аппаратура для стерилизации (см.). В каждой бактериологической лаборатории имеется автоклав (см.), аппарат Коха, печь Пастера (см. Пастера печь), аппарат для свертывания сыворотки. Для стерилизации кипячением применяют обычные стерилизаторы (см.), нагреваемые от электрической сети или другими средствами.
Для стерилизация жидких субстратов, изменяющихся при воздействии температуры, используют бактериальные фильтры (см.). Высушивание увлажняемых объектов (посуда, инструменты) после стерилизации паром или под давлением производят в сушильных шкафах (см.). Оснащение бактериологических лабораторий, необходимое для приготовления наиболее употребительных питательных сред, кроме указанной аппаратуры, включает приспособления для розлива сред, наборы реактивов и посуды для проведения некоторых химических анализов (определение аминного азота, триптофана, хлоридов и пр.), а также приборы и реактивы для определения pH среды; универсальный индикатор, индикаторы и компаратор Михаэлиса или потенциометр.
Работа с животными в бактериологических лабораториях проводится в специальном помещении — виварии. В собственно бактериологических лабораториях опыты с животными не допускаются. Для проведения основных работ с животными (взятие крови, постановка биологических проб, диагностических реакций и пр.) необходимо иметь: весы для взвешивания мышей, свинок и кроликов, станки или приспособления для их фиксации (рис. 8), набор шприцев, номера для метки животных (или красители), депиляторы.
Специфика бактериологической работы определяет особенно высокие требования к чистоте помещений бактериологических лабораторий. Особое значение имеет чистота воздуха, отсутствие в нем пыли. Уборку помещений бактериологических лабораторий лучше производить в конце рабочего дня или за несколько часов до начала работы, так как пыль, поднятая в воздух при уборке, повышает содержание в нем микробов и затрудняет возможность стерильной работы. Целесообразно после уборки помещений перед работой подвергнуть их облучению увиолевыми бактерицидными лампами в течение 0,5—1 часа. В целях профилактики внутрилабораторного заражения и возможности распространения инфекции при работе в бактериологических лабораториях необходимо выполнять следующие основные правила: 1) все лица, находящиеся в лаборатории, должны быть в халатах; 2) не допускаются излишние разговоры и хождения; 3) каждый работник должен пользоваться только закрепленным за ним рабочим местом; 4) в бактериологической лаборатории запрещается прием пищи и курение; 5) при работе с заразным материалом необходимо пользоваться инструментами (пинцетами, иглами, крючками) и ни в коем случае не прикасаться к нему руками; весь инвентарь, находившийся в контакте с заразным материалом, подлежит стерилизации или уничтожению; 6) при отсасывании жидкого материала рекомендуется пользоваться резиновыми грушами; пипетки должны быть закрыты ватными пробками; 7) переливание инфицированных жидкостей из сосуда в сосуд производят над лотком или кристаллизатором, наполненным дезинфицирующей жидкостью; 8) всю работу, связанную с посевами, пересевами, выделением культур и приготовлением препаратов из инфицированного материала, проводят у горелки, обжигая при этом края пробирок, петли, шпатели и пр.; 9) пробирки, колбы, флаконы и пр., куда в процессе работы помещается инфицированный материал, немедленно надписываются с указанием характера материала, названия и номера культуры и даты; 10) если заразный материал попал на окружающие предметы, необходимо немедленно провести тщательную дезинфекцию: залить это место дезинфицирующим раствором, а затем, если это возможно, прожечь тампоном с горящим спиртом; 11) предметы и материалы, инфицированные во время работы, регистрируют, собирают в баки или ведра, закрывают, запечатывают и в тот же день стерилизуют; 12) культуры, если это необходимо, хранят в агаровых столбиках под маслом в запаянных пробирках с этикетками; 13) регистрация и учет всех культур, а также зараженных в ходе работы животных ведется в журнале по специальной форме.
Библиогр.: Мейнелл Д. и Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология, пер. с англ., М., 1967, библиогр.; Тимаков В. Д. и Гольдфарб Д. М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии, М., 1958; Флоринский А. В. Новые технические приемы лабораторных исследований, М., 1954; Identification methods for microbiology, ed. by В. M. Gibbs a. F. A. Skinner, v. 1 — 2, L.— N. Y., 1966—1968.
Лекция по микробиологии Микробиологическая лаборатория
Лекция №2 Микробиологическая лаборатория.
В зависимости от выполняемых исследований микробиологические лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-исследовательские.
В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в них, выделяют бактериологические, вирусологические, микологические и протозоологические лаборатории.
С возбудителями инфекционных заболеваний работают только в специализированных лабораториях, обеспечивающих безопасность её персонала и невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории.
Группы возбудителей инфекционных заболеваний
Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний проводится в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку выделено четыре группы возбудителей.
Группа I: возбудители особо опасных инфекций (чума, натуральная оспа, лихорадки Ласса, Эбола и др.).
Группа II: возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных инфекций (сибирская язва, холера, лихорадка Скалистых гор, сыпной тиф, бластомикоз, бешенство и др.). В эту группу также включён ботулотоксин (но не сам возбудитель ботулизма).
Группа III: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных инфекций, выделенные в отдельные нозологические формы (возбудители коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, кандидоза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита и др.). В эту группу также включены аттенуированные штаммы бактерий групп I, II и III.
Группа IV: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых септицемий, менингитов, пневмоний, энтеритов, токсикоинфекций и острых отравлений, а также возбудители анаэробных газовых инфекций, синегнойной инфекции, аспергиллёза, амебиаза, аденовирусы, герпесвирусы и др.
Лаборатории разных групп риска.
В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами лаборатории подразделяют на четыре группы риска.
Первая группа риска: лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.
Вторая группа риска: режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.
Третья группа риска: базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.
Четвёртая группа риска: базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.
В соответствии с выполняемыми задачами выделяют:
бактериологические лаборатории в составе ЛПУ;
бактериологические лаборатории в составе комитетов Госсанэпиднадзора;
учебные бактериологические лаборатории вузов;
проблемные и отраслевые бактериологические лаборатории научно-исследовательских институтов и предприятий по выпуску бактерийных препаратов;
специализированные бактериологические лаборатории по контролю за особо опасными инфекциями;
специализированные бактериологические лаборатории по контролю за отдельными группами бактерий: микобактериями, риккетсиями, лептоспирами и др.
Большая часть микробиологических лабораторий работает с ПБА III и IV групп, а изучением возбудителей особо опасных инфекций (группы I и II) занимаются только специализированные лаборатории.
Требования к организации работы с ПБА групп опасности III и IV.
1. Базовые лаборатории, работающие с ПБА групп III и IV, должны располагаться в отдельном здании или в изолированной части здания.
2. Они должны иметь два выхода: один для сотрудников, другой — для доставки материала для исследований (допускается передача материала через передаточное окно). В лабораториях вузов, научно-исследовательских институтов и на предприятиях по выпуску бактерийных препаратов допускается наличие одного входа.
3. Лаборатории должны иметь необходимый набор помещений в соответствии с производственной мощностью и номенклатурой выполняемых исследований.
4. В помещениях должны быть проведены водопровод, электричество, отопление и вентиляция. В системе водоснабжения должны быть предусмотрены раздельные сети подачи воды для лабораторных исследований и бытовых нужд (сеть питьевой воды). Последняя должна быть защищена от обратного тока воды из лабораторной сети.
5. Вентиляция должна быть приточно-вытяжной, при этом наиболее низкое давление вытяжной вентиляции должно быть в помещениях с наибольшей опасностью инфицирования. При необходимости вентиляцию следует оснастить фильтрами тонкой очистки воздуха.
6. Помещения должны иметь естественное и искусственное освещение.
Каждая лаборатория должна иметь «чистую» и «грязную» зоны. Их планировка и размещение оборудования должны обеспечивать «проточность>> продвижения ПБА по «грязной» зоне.
«Грязная» зона включает помещения для приёма и регистрации материала, боксы и комнаты для проведения микробиологических исследований, помещения для проведения серологических исследований, комната для проведения люминесцентной микроскопии, термостатная, автоклавная для обеззараживания материала. Окна и двери всех помещений должны герметично закрываться. Приточно-вытяжная вентиляция «грязной» зоны должна быть оборудована фильтрами тонкой очистки выбрасываемого воздуха. Помещения для проведения работ с живыми ПБА должны быть оборудованы бактерицидными лампами. Обязательна маркировка автоклавов, столов, стеллажей для чистого и инфицированного материала. Покрытие лабораторной мебели, поверхности пола, стен и потолка должны быть гладкими и устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств.
«Чистая» зона включает гардероб для верхней одежды, комнаты отдыха, комнату для работы с документацией, комнату для надевания рабочей одежды, подсобные помещения, душевую, туалет, помещения для предварительных работ (препараторская, моечная, комната приготовления и разлива питательных сред и др.), стерилизационную, помещения с холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов. В «чистой» зоне возможна работа с неживыми ПБА (серологические и биохимические исследования).
Требования к проведению работ в микробиологической лаборатории
Правила работы в бактериологической лаборатории:
1. К работе допускаются лица, прошедшие специальный инструктаж о правилах работы в баклаборатории.
2. Каждый сотрудник должен иметь индивидуальную спецодежду (халат, шапочку)
3. Запрещено выходить из лаборатории в спецодежде и надевать поверх неё верхнюю одежду
4. Обязательное выполнение правил личной гигиены
5. Не допускается прием пищи и курение в баклаборатории
6. Хранение личных вещей должно быть организовано в комнате для медперсонала
7. После окончания работы обязательно проводится влажная уборка всех помещений с применением дезрастворов
8. При загрязнении патогенным материалом необходимо: а) мебель обработать дезраствором, б) лабораторную посуду стерилизовать, в) руки сначала обработать дезраствором, а затем тщательно вымыть с мылом.
9. Не допускать лишних хождений, резких движений, посторонних разговоров.
Правила работы с культурой патогенных микроорганизмов:
1. Доставлять инфицированный материал в лабораторию и переносить его из одной лаборатории в другую на территории учреждения нужно в специально приспособленной посуде (металлических биксах, ящиках, баках)
2. Весь материал, поступивший в баклабораторию, должен рассматриваться как инфицированный
3. При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность. Банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезраствором и ставят на подносы или кюветы.
4. О случаях аварии с посудой, содержащей патогенный материал, следует немедленно сообщить зав. лабораторией и немедленно провести обеззараживание объектов и обеззараживание рук, других частей тела и спецодежду.
5. Перед работой следует проверить качество посуды, пипеток, шприцев и другого оборудования.
6. При работе с культурой патогенных микроорганизмов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приемы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом:
— с инфицированным материалом работают только с помощью инструментов (пинцеты, петли, корнцанги),
— прикасаться руками к исследуемому материалу и конденсату в засеянных чашках запрещается,
— перед работой тщательно проверяют целостность стеклянной посуды, проходимость игл и надежность поршней шприцев,
— при посеве материала делают надпись на пробирках, чашках Петри, колбах, флаконах с указанием номера анализа (культуры) и даты посева,
— в пробирки и чашки Петри материал высевают вблизи от огня горелки с обжиганием петли, шпателя, краев пробирки,
— растворы, содержащие патогенные микроорганизмы, набирают пипеткой с помощью резинового баллона,
— насасывать ртом и переливать растворы из сосуда в сосуд через край нельзя
— по окончанию работы запрещается оставлять на рабочих столах нефиксированные мазки, чашки Петри, пробирки и другую посуду с инфицированным материалом, все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы) с обязательной дезинфекцией столов. Использованные пипетки полностью (вертикально) погружают в дезинфицирующий раствор, избегая образования пузырьков в каналах. Остатки ПБА, использованную посуду и оборудование собирают в закрывающиеся ёмкости и передают в автоклавную.
-категорически запрещено сливать отходы с ПБА в канализацию без предварительного обеззараживания.
— после окончания работы с ПБА и заражёнными животными, а также после ухода из лаборатории следует тщательно вымыть руки.
7. Заразный материал и отработанные культуры подлежат обязательному уничтожению. Инструменты, используемые в работе с заразным материалом и рабочее место дезинфицируют, руки после дезинфекции моют с мылом
8. Работники баклаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех заболеваний, возбудители которых могут встречаться в исследуемых объектах.
К основным методам микробиологии относятся:
• микроскопический — изучение морфологии микробов с использованием специальной микроскопической техники;
• бактериологический (культуральный) — получение чистых культур микробов и изучение их биологических свойств, позволяющие провести идентификацию, т.е. определение, вида микроба;
• серологический — выявление антител к возбудителям в биологических жидкостях организма больного (чаше в сыворотке крови; от лат. serum — сыворотка);
• аллергологический — оценка аллергических феноменов, возникающих в организме человека (на коже, слизистых оболочках или в крови) под действием компонентов или цельных клеток микроба-возбудителя;
• биологический — моделирование инфекционных процессов на лабораторных животных или куриных эмбрионах;
• молекулярно-биологический — изучение состава микробных нуклеиновых кислот с помошью полимеразной цепной реакции, сиквенирования и гибридизации ДНК.