как узнать генотип вируса гепатита с
Вирус гепатита С, РНК HCV генотипирование (типы 1,2,3)
Описание
Вирус гепатита С, HCV генотипирование (типы 1,2,3) — определение вируса гепатита С в сыворотке крови и определение генотипов ВГС 1, 2, 3 (субтипы а/b) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».
Метод ПЦР — позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК вируса, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий, специфичного для данного возбудителя участка ДНК.
С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.
Вирус гепатита С
Исследование позволяет выявить присутствие РНК вируса гепатита С (субтипы 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3) и идентифицировать генотипы 1a, 1b, 2, 3 (субтипы a/b).
Вирус гепатита С (ВГС) поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).
Вирус гепатита С подразделяют на 6 генотипов, каждый из которых, в свою очередь подразделяется на субтипы. Генотипы 1, 2 и 3 являются самыми распространёнными в мире. В Российской Федерации чаще распространён генотип 1b, чем 1a, далее с убывающей частотой — 3, 1a, 2.
Генотипирование вируса гепатита С
Генотип вируса гепатита С является наиболее важным фактором, от которого зависит эффективность и тактика противовирусного лечения хронического гепатита С. Знание генотипа вируса используется для планирования продолжительности курса лечения, что особенно важно, учитывая широкий спектр побочных действий применяемых препаратов интерферона и плохую переносимость терапии многими пациентами. Генотипирование вируса гепатита C должно выполняться всем пациентам до начала противовирусной терапии в целях планирования ее продолжительности, прогнозирования эффективности, в отдельных случаях — для расчёта дозы противовирусных препаратов.
Основной путь передачи вируса гепатита С — кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже — заражение половым путём.
Острый вирусный гепатит
Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остаётся невыявленным. У 60–85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печёночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.
Лечение при различных генотипах вируса гепатита С
Генотип 1 хуже поддаётся лечению, чем генотипы 2 и 3. Кроме того, биопсию печени важнее провести именно при генотипе 1. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлён до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови (
HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
Молекулярно-генетическое исследование для определения генотипа вируса гепатита С.
Применяемый набор реагентов может быть использован для диагностики вируса гепатита С и наиболее распространенных на территории России генотипов HCV (1a, 1b, 2, 3a и 4) in vitro.
Вирус гепатита С (ВГС).
Hepatitis C Virus (HCV) Genotyping, HCV Subtype.
Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Вирус гепатита С (ВГС) способен поражать клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты). В основном инфекция передается через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже вероятно заражение половым путем.
Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остается невыявленным. У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы. За свое скрытое, но разрушительное действие инфекция получила неофициальное название «ласковый убийца».
ВГС обладает наибольшей вариабельностью среди всех возбудителей вирусных гепатитов и благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.
Противовирусная терапия, направленная на подавление прогрессирования заболевания, в редких случаях может ускорить развитие осложнений со стороны печени. Это происходит при неправильной оценке клинических и лабораторных показателей. Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет спрогнозировать эффект от планируемой терапии.
Генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3. Кроме того, биопсию печени важнее провести именно при генотипе 1. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови ( Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Референсные значения: РНК HCV не обнаружена.
При обнаружении указывается генотип:
Результат
Значение
Очень высокий риск хронизации инфекции и развития тяжелых осложнений. Необходимо лечение более высокими дозами интерферона в течение 48 недель.
В большинстве случаев в течение 24 недель достигается планируемый терапевтический эффект.
Труднее поддается лечению, требует доз препаратов, отличных от применяемых при терапии с генотипами 2 или 3.
Что может влиять на результат?
Определение генотипа вируса гепатита С
Согласно современной классификации ВГС подразделяют на 6 генотипов, каждый из которых, в свою очередь подразделяется на субтипы. Генотип вируса обозначается арабскими цифрами (1–6), а субтип – строчными латинскими буквами. Генотипы 1, 2 и 3 являются самыми распространенными в мире. Генотип 4 наиболее часто выявляется в Северной Африке, генотип 5 – в Южной Африке, генотип 6 – в Юго-Восточной Азии. На территории РФ циркулируют 1а, 1b, 2a, 2c, 2k, 3а субтипы ВГС, регистрируются завозные случаи инфекции из стран Северной Африки (прежде всего из Египта) и Юго-Восточной Азии, вызванной 4 и 6 генотипами вируса, соответственно. 1b и 3a субтипы ВГС являются доминирующими на территории РФ.
Генотип вируса гепатита С является наиболее важным фактором, от которого зависит эффективность и тактика противовирусного лечения ХГС. Генотипы 1 и 4 ВГС хуже отвечают на противовирусное лечение, чем другие генотипы вируса (2, 3, 5 и 6). Это явилось основой для разработки различных рекомендаций по лечению для пациентов, инфицированных генотипами 1 и 4 и генотипами 2, 3, 5 и 6, соответственно, что отражено в рекомендациях по лечению ХГС Европейской Ассоциации по изучению печени (EASL).
Генотип ВГС определяется однократно, если не было риска повторного инфицирования. У некоторых пациентов возможно выявление нескольких генотипов ВГС.
Перед проведением стандартной терапии (ПЕГ-ИФН+рибавирин) достаточно определить генотип вируса гепатита С, без дополнительного субтипирования. При планировании лечения с использованием препаратов из группы ингибиторов протеазы (Телапревир, Боцепревир), для 1 генотипа ВГС необходимо провести дополнительное субтипирование, с целью дифференциации 1a и 1b субтипов вируса.
Показания к обследованию. Больные ХГС до начала противовирусной терапии с целью определения тактики лечения.
Методы лабораторных исследований
Материал для исследования. Плазма или сыворотка крови.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. В зависимости от выявленного генотипа ВГС планируется проведение терапии: при одновременном выявлении у пациента благоприятных и неблагоприятных генов.
Исследования на вирус гепатита С
Антитела к вирусу гепатита С ( суммарные)
Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют
Суммарные антитела к вирусу гепатита С представляют собой антитела классов IgM и IgG, направленные к комплексу структурных и неструктурных белков вируса гепатита С.
Это исследование является скрининговым для выявления пациентов с ВСГ. Суммарные антитела к вирусу гепатита С можно выявить в первые 2 недели заболевания, и их присутствие свидетельствует о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции.
Однозначный ответ на основании результатов данного теста получить невозможно, так как тест определяет суммарные антитела IgM и IgG. Если это ранний период острого вирусного гепатита С, то об этом свидетельствуют антитела IgM, а если это период реконвалесценции или состояние после перенесенного ВГС, то на это указывают антитела IgG.
Антитела IgG к ВГС могут сохраняться в крови реконвалесцентов на протяжении 8-10 лет с постепенным снижением их концентрации. Возможно позднее обнаружение антител спустя год и более после инфицирования. При хроническом гепатите С суммарные антитела определяются постоянно. Поэтому для уточнения сроков инфицирования необходимо отдельно определить антитела класса IgM к ВГС.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, перенесенном вирусном гепатите С или хроническом вирусном гепатите С.
Однако обнаружение суммарных антител к ВГС недостаточно для постановки диагноза ВГС и требует подтверждения для исключения ложноположительного результата исследования. Поэтому при получении положительного результата скринингового исследования на суммарные антитела к ВГС в лаборатории проводится подтверждающий тест. Окончательный результат определения суммарных антител к ВГС выдается совместно с результатом подтверждающего теста.
Антитела к вирусу гепатита С JgM
Антитела к вирусу гепатита С JgM в сыворотке в норме отсутствуют. Наличие антител класса JgM к ВГС в крови пациента позволяет верифицировать активную инфекцию. Антитела класса JgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С.
Антитела класса JgM к ВГС появляются в крови пациента спустя 2 недели после развития клинической картины острого вирусного гепатита С или обострения хронического гепатита и обычно исчезают спустя 4-6 месяцев. Снижение их уровня может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител JgM к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител JgM к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции или активном хроническом вирусном гепатите С.
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита С в крови в норме отсутствует.
В отличие от серологических методов диагностики ВГС, где обнаруживают антитела к ВГС, ПЦР позволяет выявить наличие непосредственно РНК ВГС в крови как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих служит консервативный участок генома гепатита С.
Обнаружение только антител к ВГС подтверждает лишь факт инфицирования пациента, но не позволяет судить об активности инфекционного процесса (о репликации вируса), о прогнозе заболевания. Кроме того, антитела к вирусу ГС обнаруживают как в крови больных острым и хроническим гепатитом,так и у тех пациентов, кто болел и выздоровел, а нередко антитела в крови появляются только спустя несколько месяцев после появления клинической картины заболевания, что затрудняет диагностику. Обнаружение вируса в крови методом ПЦР – более информативный метод диагностики.
Качественное выявление ВГС методом ПЦР в крови свидетельствует о виремии, позволяет судить о размножении вируса в организме и является одним из критериев эффективности противовирусной терапии.
Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 50-100 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выделение ДНК-пробы, специфичность – 98%. Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью ПЦР на ранних этапах развития вирусной инфекции (возможно уже через 1-2 недели после заражения) на фоне полного отсутствия каких-либо серологических маркеров может служить самым ранним свидетельством инфицирования.
Однако изолированное выявление РНК вируса гепатита С на фоне полного отсутствия каких-либо других серологических маркеров не может полностью исключить ложноположительный результат ПЦР. В таких случаях требуется всесторонняя оценка клинических, биохимических и морфологических исследований и повторное неоднократное подтверждение наличия инфекции ПЦР.
Согласно рекомендациям ВОЗ для подтверждения диагноза вирусного гепатита С необходимо троекратное выявление РНК вируса гепатита С в крови пациента.
Обнаружение РНК вируса гепатита С методом ПЦР используется в целях:
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (количественно)
Количественный метод определения содержания РНК вируса гепатита С в крови дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. Аналитическая чувствительность метода составляет от 5.102 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови, специфичность – 98%.
Уровень виремии оценивают следующим образом: при содержании РНК ВГС от 10^2 до 10^4 копий/мл – низкий; от 10^5 до 10^7 копий/мл – средний и выше 10^8 копий /мл – высокий.
Количественное определение содержания РНК ВГС в сыворотке крови методом ПЦР имеет важное значение для прогноза эффективности лечения интерфероном-альфа. Показано, что наиболее благоприятный прогноз заболевания и наибольшую вероятность положительного ответа на противовирусную терапию имеют лица с низким уровнем виремии. При эффективном лечении уровень виремии снижается.
Метод ПЦР позволяет не только выявить РНК ВГС в крови, но и установить его генотип. Наиболее важное значение для клинической практики имеют 5 субтипов ВГС – 1а, 1b, 2а, 2b и 3а. В нашей стране наиболее часто встречается субтип 1b, далее идут 3а, 1а, 2а.
Определение генотипа (субтипа) вируса имеет важное значение для прогноза течения ВГС и подбора пациентов с хроническим ВГС к проведению лечения интерфероном-альфа и рибавирином.
При инфицировании пациента субтипом 1b хронический ВГС развивается примерно в 90% случаев, при наличии субтипов 2а и 3а – в 33-50%. У пациентов с субтипом 1b заболевание протекает в более тяжелой форме и часто заканчивается развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. При инфицировании субтипом 3а у больных более выражен стеатоз, поражение желчевыводящих путей, активность АЛТ и менее выражены фиброзные изменения в печени, чем у пациентов с субтипом 1b.
Показаниями к лечению хронического ВГС интерфероном–альфа являются:
Как узнать генотип вируса гепатита с
Генопирование вируса гепатита С
Вирус гепатита С отличается высокой изменчивостью — способностью к мутациям (изменениям в генетическом строении). Способность к изменению позволяют вирусу ускользать от иммунной системы и затрудняет лечение гепатита С. В действительности, вирус гепатита С — это целый спектр подобных вирусов, которые можно выделить в отдельные подгруппы, которые классифицируют по генотипам и субтипам.
Насчитывают 11 генотипов ВГС, однако в России распространены 3 основных генотипа — 1, 2 и 3, поэтому большинство диагностических центров определяют генотипы (генотипируют) 1, 2 и 3.
Генотипирование (определение генотипа вируса) — один из самых важных анализов. Он позволит предсказать шансы на успешное лечение и поможет врачу определить необходимые дозы препаратов и длительность терапии.
Зачем нужно определять генотип?
Это очень важный анализ. Разные генотипы имеют различную резистентность (устойчивость) к лечению. Так, например, генотипы 2 и 3 лечатся стандартной терапией в течение 24 недель с эффективностью до 85%, а генотип 1 и 4 — 48 недель с эффективностью до 60%.
Имеет ли значение субтип генотипа, например 1a?
Нет, клинического значения субтип не имеет. Главное·— определить цифру (сам генотип).
Что значит, если в результатах генотипирования стоит
«генотип не типируется»?
Это может быть по двум причинам — у Вас не типичный для нашего региона, «экзотический» генотип HCV или низкая концентрация вирусной РНК в крови.
Может ли генотип измениться с течением времени?
Нет, для этого требуется тысячи лет. У некоторых пациентов имеется 2 и более генотипов, но преобладает один. В таком случае анализом может обнаружиться только один генотип. Бывают случаи, когда у пациентов определяли, к примеру, генотип 3a, а после лечения выявляли генотип 1b. Причиной тому было одновременное присутствие генотипов 3 и 1b. От первого типа удалось избавиться в результате терапии, а второй из-за устойчивости к препаратам оставался в организме.
Количественное определение РНК гепатита С
Почему важно делать количественное определение РНК вируса гепатита С?
Показания к назначению анализа:
Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.
Определение тактики лечения пациентов.
Точная оценка эффективности лечения.
Консультативно-диагностическая поликлиника НПО «ВИРИОН» предлагает широкий спектр современной лабораторной диагностики гепатита С и других заболеваний печени.