кавитирующая морула на 5 день что это
Развитие эмбрионов
1 день. Оценка оплодотворения.
Спустя 16-18 часов после инсеминации (слияния полученных ооцитов и спермы) производится первая оценка оплодотворения. К этому времени эмбриолог видит сформировавшиеся пронуклеусы. На данном этапе происходит первая селекция – неоплодотворенные ооциты и аномальные зиготы изолируются от нормальных зигот.
Рис.1 Оплодотворенные яйцеклетки (пронуклеусы) – видны по два клеточных ядра.
2 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 48 часов после получения ооцитов эмбриолог оценивает дробление эмбрионов, их морфологию (строение). Под морфологической оценкой понимают количество бластомеров (клеток) и аномалии цитоплазмы и ядра.
Идеальный эмбрион на 2 день должен иметь 4 равных по размеру одноядерных бластомеры без фрагментации.
Рис.2 Слева на картинке идеально сформированный эмбрион, состоящий из 4 бластомеров. Справа – строение нарушено, дальнейшее развитие прекратилось.
3 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 72 часа после получения ооцитов производится оценка эмбрионов по следующим параметрам:
Количество бластомеров (клеток)- указывается цифра. В норме – 6-8 клеток.
На 3 день эмбриолог и лечащий врач могут принимать решение о сроке переноса эмбрионов. При переносе эмбрионов на 5 – день, на 3-й день все качественные эмбрионы переносятся в другую среду для культивирования до стадии бластоцисты.
Рис.3 Слева эмбрион отличного качества – оценка 8; Эмбрион по центру имеет небольшую фрагментацию – оценка 6 Sl Fr; Справа эмбрион сильно фрагментирован, подсчет бластомеров затруднен.
4 день. Дальнейшее культивирование эмбрионов.
К 4 дню процесс компактизации должен быть завершен, и эмбрион достигает стадии морулы.
Рис 4. Две отлично сформированные морулы.
5 день. Культивирование эмбрионов и перенос.
К этому времени эмбрион должен развиться до стадии бластоцисты. На основании морфологических признаков делается оценка возможности бластоцисты к дальнейшему развитию и принимается решение о ее пригодности к переносу в полость матки или витрификации (заморозке). Бластоцисты имеют цифровую и буквенную оценки.
Оценка степени развития бластоцисты и статуса хэтчинга (вылупления из оболочки):
1 – ранняя бластоциста: бластоцель меньше половины объема эмбриона (eBl);
2- бластоциста: бластоцель больше половины объема эмбриона (Bl 2);
3- полная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион (Bl 3)$
4- экпандированная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион, истончение зоны внешней оболочки (Bl 4 и Bl 5)
5- вылупляющаяся бластоциста: трофэктодерма начинает выступать их зоны вншней оболочки (Bl 5);
Оценка внутренне клеточной массы:
А – много плотно упакованных клеток;
B – несколько свободно сгруппированных клеток;
C – мало клеток, клетки плохо сгруппированы.
Оценка трофэктодермы:
А – много клеток, формирующих связанный эпителий;
В — несколько клеток, формирующих свободный эпителий;
C — несколько клеток серповидной формы.
Таким образом, эмбрион получает тройную оценку: BL 5АА
Почему происходит остановка развития эмбрионов?
В чём причина остановки развития эмбрионов?
Существуют несколько причин по которым женщина не получает долгожданный перенос эмбрионов во время проведения протокола ЭКО, потому что прекращается процесс их деления. Статистика утверждает что 15-20% оплодотворенных яйцеклеток останавливаются в своем делении в процессе размножения на стадиях 3-4 клетки на вторые сутки. Останавливается деление яйцеклеток – по причине естественного процесса. Природный естественный отбор, позволяющий предотвратить зарождение плода с генетическим отклонением.
Современная эмбриологическая лаборатория в которой они культивируются оснащена специальным оборудованием, которое позволяет осуществлять процесс деления яйцеклетки с отработанной до мельчайших подробностей технологическими тонкостями.
Опираясь на прогрессивные технологии и высокотехнологичное оборудование обеспечивающее стабильные условия культивирования и развитие эмбриона после переноса, причину остановки в развитии и их делении следует рассматривать исключительно в плоскости жизнестойкости самого генетического материала.
Развитие эмбриона при ЭКО поэтапно дням:
Дата когда проводится пункция яичников и производится забор сперматозоида донора называется нулевой датой дня. Начало срока формирования плода начинается от момента смешивания сперматозоидов и ооцитов в специальной подготовленной специалистами среде. Результат зачатия возможно увидеть после 17 часов, с момента смешиваний мужской и женской гаметы. После 18 часов возможно рассмотреть в стадии зиготы – эмбрион с женскими или мужскими ядрами. Новый сформированный плод имеет диплоидный набор хромосомы и полученный от родителя индивидуальный генотип.
На 2 сутки нахождения плода в зиготе начинается его разделение, его клеточный состав называют бластомером, этих клеток в норме наблюдают по 2-4.
На 3 день он должен выделить шесть или восемь бластомеров. Это решающий этап создания зародышей: при обнаружении генетических дефектов, ход дальнейшего процесса останавливается, и он перестает существовать. Связывают это с тем, что в первичные часы после оплодотворения эмбрион питается питательным веществом и энергией материнской клетки, в следующие часы у него должен включиться собственный механизм жизнеобеспечения. Если он имеет генетический дефект, значит механизм не включается и он погибает.
На 4 сутки развития эмбриона при ЭКО у него сформировывается 10-16 бластомеров, процесс переходит в этап морула. В природе, находясь в организме женщины в этот период характеризуется попаданием эмбриона из маточного прохода в проход полости в матки. За четвёртые сутки образования морула сформировывается полостной объем, в котором клетка разделяется на одну и вторую группу. Когда полостное пространство заполняет большую половину клетки, процесс превращения морулы перетекает в стадию бластоцисты.
На 5-6 день развития эмбриона при ЭКО они совершенно сформированы, именно в этот период врачи репродуктологи культивируют плод в полость матки. Физиология искусственного состава среды не позволяет им выживать до 6 суток. Объем бластоцист равномерно расширяется, следовательно истончается ее оболочка. Возможен ее разрыв и ожидаемый выход плода, полностью сформированного для внедрения в слой эндометрия. Врачи это называют хетчингом. В варианте когда толщина оболочки чрезмерно толстая и плод не имеет возможности прорвать её сам, ему помогают это сделать. Эта процедура называется вспомогательный хетчинг. При помощи вспомогательного хэтчинга можно извлечь плоды с самым высоким качеством, и даже продиагностировать их генотип перед проведением имплантации.
На 7 день после проведения протокола ЭКО он помещается в слой эндометрия находящийся в полостном пространстве маточной трубы. Наружные клетки перестраиваются в плаценту, а внутренние в тело будущего ребёнка.
На 8 день наружные поверхностные ткани клетки формируют множество трубчатых ворсинок называемых трофобластомой. При помощи них обеспечивается питательная среда плода и начинает поступать кислород. В этом периоде формирования плод называют гаструлой.
На 9 сутки он все дальше перемещается в слой эндометрия. Начинается процесс переноса плода — имплантации. Возможно кровотечение из поврежденных ооцитов.
На 10 день заканчивается этап имплантации и начинается формирование плаценты. На 11 день плацентарные макрофаги уже синтезируют ХГЧ.
На 13-14 день ХГЧ попадая в кровь и концентрируясь в ней до достаточного уровня чтобы определить факт долгожданного зачатия.
Остановка эмбриогенеза при ЭКО, причины
Выше перечислены множественные причины остановки или неправильного формирования эмбриона после проведения ЭКО. Основным пунктом по мнению учёных генетиков всё же является проблема генетической аномалией. Она проявляется на стадиях зиготы, на 3 день, после переноса плода в слой эндометрия.
Замершая беременность. Причина остановки развития беременности
Наблюдаются случаи невынашиваемости беременными своего плода. Останавливается развитие плода в первых днях триместра. Это говорит об абсолютном физиологическом характере остановки. Причина кроется в искусственном отборе, связанном с решением материнского организма. Другими словами, биологический фактор женщины анализирует произошедшее оплодотворение, и если плод имеет дефект, то организм перестает подпитывать такую беременность. Он принимает решение о переносе и прекращении процесса развития плода и его отторжении, чтобы не расходовать силы своего биологического ресурса. Этим объясняется остановка развития эмбрионов.
В процессе оплодотворения может участвовать немалое количество плодоносных яйцеклеток которые могут иметь изъяны в хромосомном строении с самого начала своего формирования. Эти возможные эмбриональные дефекты трудно перенести и выявить на начальном этапе формирования эмбрионов, а тем более их подкорректировать в процессе. Всё это называется расплатой за излишек биологического разнообразия.
Репродуктологи наблюдают случаи когда остановка беременности происходит до имплантационного момента: интеллект женского организма не принимает данные сигнальных посылов о наступлении беременности. В жизни женщины наступает обычный месячный цикл, начинается менструация. Беременность не наступает.
Оценка качества эмбрионов
Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.
Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.
Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.
В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.
Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).
Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.
Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).
2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)
Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.
Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).
К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.
На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.
Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.
Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.
Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.
Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.
В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)
Скидка 50% на первичный прием репродуктолога
Заполнив анкету для будущих родителей, вы сэкономите время врача на первичном приеме, поэтому он будет для вас стоить 50% от обычной цены.
Оценка качества ооцитов и эмбрионов
Все пациенты интересуются качеством полученных клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?». Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения. Выглядит это вот так:
В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.
После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.
Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI. Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают. Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого, ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.
При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.
Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.
Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.
Зрелый ооцит выглядит так
При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.
Что такое качество ооцита
Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.
Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре.
Оценка оплодотворения в стадии бластоцисты
Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.
Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.
На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением.
Триплоидный эмбрион (3pn)
Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.
Оценка качества эмбрионов 2-3 дня развития
Начиная со вторых суток эмбрионального развития начинается фаза дробления.
Эмбрион хорошего качества выглядит так.
4-е сутки эмбрионального развития
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией. Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов ооцита. Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.
На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.
Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.
Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:
Морулы отличного качества
Морула плохого качества
Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.
Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты). Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы.
Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы. Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6. Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы. Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.
Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность.